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Measuring Serum Antibody with an Agglutination Assay

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    (Spanish/Español translation by Juliana Salomón, BA, Argentina. Reviewed by Dr. Gabriela Gorelik, University of Michigan.)
    Un ensayo de aglutinación es una manera simple de detectar y medir a los anticuerpos en un especímen...
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    clínico dirigido contra un antígeno específico de interés.
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    En esta animación se demostrarán los principios y las dificultades potenciales del ensayo.
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    El reactivo principal usado en el ensayo es una solución de perlas diminutas insolubles, por lo general compuestas de
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    látex.
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    Una alternativa para medir los anticuerpos contra un patógeno microbiano es el uso de las...
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    células bacterianas eliminadas o células de levadura como partícula aglutinante.
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    Sin embargo, en este ejemplo se utilizan perlas de látex que se han preparado de manera que el antígeno...
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    de interés cubra sus superficies y que se concentren lo suficiente como para producir una suspensión...
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    visiblemente lechosa.
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    Para medir los anticuerpos contra el antígeno, las partículas se añaden a los pocillos de una...
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    placa de microtitulación de 96 pocillos y luego se añade suero de diferentes pacientes...
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    a los pocillos de la primera columna.
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    En las filas se preparan diluciones al medio de los sueros y luego se añaden, en las dos últimas columnas,
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    un suero de control positivo y uno de control negativo.
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    Si se deja incubar la placa a temperatura ambiente, los pocillos que contienen el suero de control negativo...
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    permanecen sin cambios.
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    Los pocillos que contienen el suero de control positivo desarrollan un botón visible en el...
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    fondo de los pocillos, en los que la solución cambia de un aspecto lechoso a uno claro.
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    Entonces, ¿cómo se explica la apariencia de los depósitos positivos? ¿cómo se explica la ausencia...
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    de cambios en los depósitos negativos?
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    Para entender lo que está pasando, veamos cómo se ven al microscopio los pocillos...
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    con el control negativo y positivo para ver lo que ocurre.
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    Cuando no hay ningún anticuerpo en el pocillo, las perlas permanecen en suspensión, dando...
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    al pocillo un aspecto lechoso.
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    Sin embargo, cuando los anticuerpos específicos están presentes, se unen y se entrecruzan con las perlas.
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    Esto hace que las perlas se aglutinen y formen grandes agregados que se hunden hasta el fondo de...
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    los pocillos de fondo redondo.
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    Hacen que la suspensión se vea clara en lugar de lechosa porque los agregados se depositan...
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    en el fondo del pocillo formando un botón.
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    Así, podrán ver el botón en el fondo de los pocillos que tengan suficientes anticuerpos específicos...
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    como para precipitar las perlas.
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    Pero cuando el anticuerpo se diluye, el botón ya no aparece.
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    El título de anticuerpos del paciente es la última disolución del suero que produce un botón.
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    Pero, ¿cómo se explica la ausencia de un botón en los pocillos más concentrados de suero...
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    con el título más elevado mostrado por la flecha naranja?
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    Imagínese un pocillo que tiene muchas más moléculas de anticuerpos que perlas.
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    En esta situación, las perlas estarán completamente recubiertas con anticuerpo y no habrá...
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    posibilidad de entrecruce y precipitación.
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    Este fenómeno, conocido como prozona, a veces se produce en casos de sífilis.
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    La prueba de detección estándar para sífilis es un ensayo de aglutinación en el que se añade...
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    suero sin diluir a perlas recubiertas con el antígeno cardiolipina.
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    En la sífilis secundaria, los títulos de anticuerpos pueden ser tan altos que el ensayo exhibe...
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    una prozona y resulta falso negativo
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    Entonces, ¿cómo cree que podría superar este problema potencial y hacer un diagnóstico de laboratorio...
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    correcto?
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    ¿Ha pensado en diluir el suero y luego volver a hacer la prueba?
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    Al diluir el anticuerpo en esta situación, las cantidades de anticuerpos y antígenos están más cerca...
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    de ser equivalentes la una a la otra.
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    Entonces, pueden darse las condiciones para un entrecruzamiento.
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    Ahora, cuando se produce el entrecruzamiento se forma el precipitado y el botón se observa en el fondo...
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    del tubo lo que indica un resultado positivo.
Title:
Measuring Serum Antibody with an Agglutination Assay
Description:

This short animation demonstrates measuring serum antibody with an agglutination assay. This resource was developed by Cary Engleberg of the University of Michigan. It is part of a larger learning module about laboratory methods for clinical microbiology. The full learning module, editable animation, and video transcript are available at http://open.umich.edu/education/med/oernetwork/med/microbiology/clinical-microbio-lab/2009. Copyright 2009-2010, Cary Engleberg. This is licensed under a Creative Commons Attribution Noncommercial 3.0 License http://creativecommons.org/licenses/by-nc/3.0/.
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Video Language:
English
Duration:
04:08

Spanish subtitles

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