WEBVTT 00:00:00.269 --> 00:00:04.081 (Spanish/Español translation by Juliana Salomón, BA, Argentina. Reviewed by Dr. Gabriela Gorelik, University of Michigan.) Un ensayo de aglutinación es una manera simple de detectar y medir a los anticuerpos en un especímen... 00:00:04.081 --> 00:00:09.379 clínico dirigido contra un antígeno específico de interés. 00:00:09.379 --> 00:00:15.006 En esta animación se demostrarán los principios y las dificultades potenciales del ensayo. 00:00:15.006 --> 00:00:21.038 El reactivo principal usado en el ensayo es una solución de perlas diminutas insolubles, por lo general compuestas de 00:00:21.038 --> 00:00:22.083 látex. 00:00:22.083 --> 00:00:28.016 Una alternativa para medir los anticuerpos contra un patógeno microbiano es el uso de las... 00:00:28.016 --> 00:00:31.001 células bacterianas eliminadas o células de levadura como partícula aglutinante. 00:00:31.001 --> 00:00:36.055 Sin embargo, en este ejemplo se utilizan perlas de látex que se han preparado de manera que el antígeno... 00:00:36.055 --> 00:00:41.087 de interés cubra sus superficies y que se concentren lo suficiente como para producir una suspensión... 00:00:41.087 --> 00:00:45.071 visiblemente lechosa. 00:00:45.071 --> 00:00:49.063 Para medir los anticuerpos contra el antígeno, las partículas se añaden a los pocillos de una... 00:00:49.063 --> 00:00:55.002 placa de microtitulación de 96 pocillos y luego se añade suero de diferentes pacientes... 00:00:55.002 --> 00:00:57.003 a los pocillos de la primera columna. 00:00:57.003 --> 00:01:02.098 En las filas se preparan diluciones al medio de los sueros y luego se añaden, en las dos últimas columnas, 00:01:02.098 --> 00:01:12.006 un suero de control positivo y uno de control negativo. 00:01:12.006 --> 00:01:16.013 Si se deja incubar la placa a temperatura ambiente, los pocillos que contienen el suero de control negativo... 00:01:16.013 --> 00:01:18.609 permanecen sin cambios. 00:01:18.609 --> 00:01:22.929 Los pocillos que contienen el suero de control positivo desarrollan un botón visible en el... 00:01:22.929 --> 00:01:28.084 fondo de los pocillos, en los que la solución cambia de un aspecto lechoso a uno claro. 00:01:28.084 --> 00:01:35.219 Entonces, ¿cómo se explica la apariencia de los depósitos positivos? ¿cómo se explica la ausencia... 00:01:35.219 --> 00:01:38.017 de cambios en los depósitos negativos? 00:01:38.017 --> 00:01:42.679 Para entender lo que está pasando, veamos cómo se ven al microscopio los pocillos... 00:01:42.679 --> 00:01:46.027 con el control negativo y positivo para ver lo que ocurre. 00:01:46.027 --> 00:01:51.049 Cuando no hay ningún anticuerpo en el pocillo, las perlas permanecen en suspensión, dando... 00:01:51.049 --> 00:01:53.169 al pocillo un aspecto lechoso. 00:01:53.169 --> 00:01:59.959 Sin embargo, cuando los anticuerpos específicos están presentes, se unen y se entrecruzan con las perlas. 00:01:59.959 --> 00:02:05.569 Esto hace que las perlas se aglutinen y formen grandes agregados que se hunden hasta el fondo de... 00:02:05.569 --> 00:02:07.189 los pocillos de fondo redondo. 00:02:07.189 --> 00:02:12.056 Hacen que la suspensión se vea clara en lugar de lechosa porque los agregados se depositan... 00:02:12.056 --> 00:02:17.075 en el fondo del pocillo formando un botón. 00:02:17.075 --> 00:02:22.032 Así, podrán ver el botón en el fondo de los pocillos que tengan suficientes anticuerpos específicos... 00:02:22.032 --> 00:02:25.011 como para precipitar las perlas. 00:02:25.011 --> 00:02:29.086 Pero cuando el anticuerpo se diluye, el botón ya no aparece. 00:02:29.086 --> 00:02:49.067 El título de anticuerpos del paciente es la última disolución del suero que produce un botón. 00:02:49.067 --> 00:02:54.055 Pero, ¿cómo se explica la ausencia de un botón en los pocillos más concentrados de suero... 00:02:54.055 --> 00:02:59.035 con el título más elevado mostrado por la flecha naranja? 00:02:59.035 --> 00:03:04.019 Imagínese un pocillo que tiene muchas más moléculas de anticuerpos que perlas. 00:03:04.019 --> 00:03:08.029 En esta situación, las perlas estarán completamente recubiertas con anticuerpo y no habrá... 00:03:08.029 --> 00:03:12.032 posibilidad de entrecruce y precipitación. 00:03:12.032 --> 00:03:18.073 Este fenómeno, conocido como prozona, a veces se produce en casos de sífilis. 00:03:18.073 --> 00:03:23.051 La prueba de detección estándar para sífilis es un ensayo de aglutinación en el que se añade... 00:03:23.051 --> 00:03:28.002 suero sin diluir a perlas recubiertas con el antígeno cardiolipina. 00:03:28.002 --> 00:03:33.021 En la sífilis secundaria, los títulos de anticuerpos pueden ser tan altos que el ensayo exhibe... 00:03:33.021 --> 00:03:36.003 una prozona y resulta falso negativo 00:03:36.003 --> 00:03:40.087 Entonces, ¿cómo cree que podría superar este problema potencial y hacer un diagnóstico de laboratorio... 00:03:40.087 --> 00:03:42.039 correcto? 00:03:42.039 --> 00:03:46.061 ¿Ha pensado en diluir el suero y luego volver a hacer la prueba? 00:03:46.061 --> 00:03:51.000 Al diluir el anticuerpo en esta situación, las cantidades de anticuerpos y antígenos están más cerca... 00:03:51.000 --> 00:03:53.051 de ser equivalentes la una a la otra. 00:03:53.051 --> 00:03:56.067 Entonces, pueden darse las condiciones para un entrecruzamiento. 00:03:56.067 --> 00:04:01.051 Ahora, cuando se produce el entrecruzamiento se forma el precipitado y el botón se observa en el fondo... 00:04:01.051 --> 00:04:03.970 del tubo lo que indica un resultado positivo.