0:00:00.269,0:00:04.081 (Spanish/Español translation by Juliana Salomón, BA, Argentina. Reviewed by Dr. Gabriela Gorelik, University of Michigan.)[br]Un ensayo de aglutinación es una manera simple de detectar y medir a los anticuerpos en un especímen... 0:00:04.081,0:00:09.379 clínico dirigido contra un antígeno específico de interés. 0:00:09.379,0:00:15.006 En esta animación se demostrarán los principios y las dificultades potenciales del ensayo. 0:00:15.006,0:00:21.038 El reactivo principal usado en el ensayo es una solución de perlas diminutas insolubles, por lo general compuestas de 0:00:21.038,0:00:22.083 látex. 0:00:22.083,0:00:28.016 Una alternativa para medir los anticuerpos contra un patógeno microbiano es el uso de las... 0:00:28.016,0:00:31.001 células bacterianas eliminadas o células de levadura como partícula aglutinante. 0:00:31.001,0:00:36.055 Sin embargo, en este ejemplo se utilizan perlas de látex que se han preparado de manera que el antígeno... 0:00:36.055,0:00:41.087 de interés cubra sus superficies y que se concentren lo suficiente como para producir una suspensión... 0:00:41.087,0:00:45.071 visiblemente lechosa. 0:00:45.071,0:00:49.063 Para medir los anticuerpos contra el antígeno, las partículas se añaden a los pocillos de una... 0:00:49.063,0:00:55.002 placa de microtitulación de 96 pocillos y luego se añade suero de diferentes pacientes... 0:00:55.002,0:00:57.003 a los pocillos de la primera columna. 0:00:57.003,0:01:02.098 En las filas se preparan diluciones al medio de los sueros y luego se añaden, en las dos últimas columnas, 0:01:02.098,0:01:12.006 un suero de control positivo y uno de control negativo. 0:01:12.006,0:01:16.013 Si se deja incubar la placa a temperatura ambiente, los pocillos que contienen el suero de control negativo... 0:01:16.013,0:01:18.609 permanecen sin cambios. 0:01:18.609,0:01:22.929 Los pocillos que contienen el suero de control positivo desarrollan un botón visible en el... 0:01:22.929,0:01:28.084 fondo de los pocillos, en los que la solución cambia de un aspecto lechoso a uno claro. 0:01:28.084,0:01:35.219 Entonces, ¿cómo se explica la apariencia de los depósitos positivos? ¿cómo se explica la ausencia... 0:01:35.219,0:01:38.017 de cambios en los depósitos negativos? 0:01:38.017,0:01:42.679 Para entender lo que está pasando, veamos cómo se ven al microscopio los pocillos... 0:01:42.679,0:01:46.027 con el control negativo y positivo para ver lo que ocurre. 0:01:46.027,0:01:51.049 Cuando no hay ningún anticuerpo en el pocillo, las perlas permanecen en suspensión, dando... 0:01:51.049,0:01:53.169 al pocillo un aspecto lechoso. 0:01:53.169,0:01:59.959 Sin embargo, cuando los anticuerpos específicos están presentes, se unen y se entrecruzan con las perlas. 0:01:59.959,0:02:05.569 Esto hace que las perlas se aglutinen y formen grandes agregados que se hunden hasta el fondo de... 0:02:05.569,0:02:07.189 los pocillos de fondo redondo. 0:02:07.189,0:02:12.056 Hacen que la suspensión se vea clara en lugar de lechosa porque los agregados se depositan... 0:02:12.056,0:02:17.075 en el fondo del pocillo formando un botón. 0:02:17.075,0:02:22.032 Así, podrán ver el botón en el fondo de los pocillos que tengan suficientes anticuerpos específicos... 0:02:22.032,0:02:25.011 como para precipitar las perlas. 0:02:25.011,0:02:29.086 Pero cuando el anticuerpo se diluye, el botón ya no aparece. 0:02:29.086,0:02:49.067 El título de anticuerpos del paciente es la última disolución del suero que produce un botón. 0:02:49.067,0:02:54.055 Pero, ¿cómo se explica la ausencia de un botón en los pocillos más concentrados de suero... 0:02:54.055,0:02:59.035 con el título más elevado mostrado por la flecha naranja? 0:02:59.035,0:03:04.019 Imagínese un pocillo que tiene muchas más moléculas de anticuerpos que perlas. 0:03:04.019,0:03:08.029 En esta situación, las perlas estarán completamente recubiertas con anticuerpo y no habrá... 0:03:08.029,0:03:12.032 posibilidad de entrecruce y precipitación. 0:03:12.032,0:03:18.073 Este fenómeno, conocido como prozona, a veces se produce en casos de sífilis. 0:03:18.073,0:03:23.051 La prueba de detección estándar para sífilis es un ensayo de aglutinación en el que se añade... 0:03:23.051,0:03:28.002 suero sin diluir a perlas recubiertas con el antígeno cardiolipina. 0:03:28.002,0:03:33.021 En la sífilis secundaria, los títulos de anticuerpos pueden ser tan altos que el ensayo exhibe... 0:03:33.021,0:03:36.003 una prozona y resulta falso negativo 0:03:36.003,0:03:40.087 Entonces, ¿cómo cree que podría superar este problema potencial y hacer un diagnóstico de laboratorio... 0:03:40.087,0:03:42.039 correcto? 0:03:42.039,0:03:46.061 ¿Ha pensado en diluir el suero y luego volver a hacer la prueba? 0:03:46.061,0:03:51.000 Al diluir el anticuerpo en esta situación, las cantidades de anticuerpos y antígenos están más cerca... 0:03:51.000,0:03:53.051 de ser equivalentes la una a la otra. 0:03:53.051,0:03:56.067 Entonces, pueden darse las condiciones para un entrecruzamiento. 0:03:56.067,0:04:01.051 Ahora, cuando se produce el entrecruzamiento se forma el precipitado y el botón se observa en el fondo... 0:04:01.051,0:04:03.970 del tubo lo que indica un resultado positivo.