(Portuguese/ Português translation by Ana Julia Perrotti-Garcia, FFLCH USP SP, Freelance Translator & Interpreter) [Música]
Passo 1. Prepare o esfregaço
Prepare o esfregaço: flambe a alça e colete o inóculo de uma cultura fresca.
Depois de colocar uma gota de selante na lâmina.
Colete parte do inóculo do centro da cultura.
Umedeça o material coletado, unindo-o ao selante, sobre a lâmina
fazendo um esfregaço de cerca de dois a três centímetros.
Passo 2. Aqueça suavemente para fixar a lâmina (depois de secar ao ar).
Após secar ao ar, aqueça para fixar o esfregaço, passando pela chama
cerca de três ou quatro vezes.
Esse procedimento mata os microorganismos.
Fixando-os à lâmina e impede sua autólise,
tornando os microorganismos permeáveis à coloração.
Passo 3. Cobrir o esfregaço com cristal violeta
Cubra o esfregaço com cristal violeta por um minuto.
Deixe o corante agir por 60 segundos.
Remova o excesso de cristal violeta e lave em água corrente, sem jatos fortes.
Passo 4. Cobrir a lâmina com solução iodada de Lugol
Cubra o esfregaço com solução de Lugol por um minuto.
Deixe o corante agir por 60 segundos.
Lavo excesso de lugol com água corrente, sem jatos fortes.
Passo 5. Descoloração rápida com acetona.
O esfregaço é descolorido com acetona por dez segundos.
Remova o excesso de álcool e lave em água corrente, sem jatos fortes.
Passo 6. Contra-coloração com vermelho neutro (ou safranina).
Use vermelho neutro como contra-corante, por um minuto.
Cubra o esfregaço com o vermelho neutro.
Deixe o corante agir por 60 segundos.
Remova o excesso de vermelho neutro em água corrente.
Aplique papel filtro ou papel absorvente, para eliminar o excesso de umidade.
Não esfregue.
A lâmina está pronta para o exame microscópico em 100X (imersão em óleo).
Coloque o óleo de imersão na lâmina corada.
Monte a lâmina no microscópio.
Estamos usando a objetiva para aumento 500X. Examine a lâmina.