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00:00:00,269 --> 00:00:04,810
(Portuguese/Português translation by Ana Julia Perrotti-Garcia, FFLCH USP SP, Freelance Translator & Interpreter)
Um ensaio de aglutinação é um modo simples de detectar e medir anticorpos

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00:00:04,810 --> 00:00:09,379
em uma amostra clínica, contra um antígeno específico.

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00:00:09,379 --> 00:00:15,020
Nesta animação serão demonstrados os princípios e as armadilhas potenciais do ensaio.

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00:00:15,060 --> 00:00:21,380
O principal reagente utilizado no ensaio é uma solução de pequenas pérolas insolúveis

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00:00:21,380 --> 00:00:22,830
geralmente compostas de látex.

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00:00:22,830 --> 00:00:28,160
Alternativamente, para medir anticorpos contra um agente patogênico microbiano pode-se usar

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00:00:28,160 --> 00:00:31,100
bactérias mortas ou células de levedura como partículas aglutinantes.

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00:00:31,100 --> 00:00:36,550
Mas, neste exemplo, usamos pérolas de látex, preparadas de modo a

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00:00:36,550 --> 00:00:41,870
serem revestidas pelo antígeno pesquisado e tenham uma concentração suficiente

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00:00:41,870 --> 00:00:45,710
para produzir uma suspensão leitosa visível.

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00:00:45,710 --> 00:00:49,630
Para medir anticorpos contra o antígeno, as partículas são adicionadas aos orifícios

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00:00:49,630 --> 00:00:55,020
de uma placa de microtitulação com 96 orifícios. Adiciona-se soro de diferentes pacientes

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00:00:55,020 --> 00:00:57,300
aos orifícios da primeira coluna.

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00:00:57,300 --> 00:01:02,980
Duas diluições dos soros são preparadas nas fileiras.

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00:01:02,980 --> 00:01:09,980
Então, adiciona-se soro de controle positivo e negativo nas últimas duas colunas.

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00:01:12,060 --> 00:01:16,130
Quando a placa é incubada à temperatura ambiente,

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00:01:16,130 --> 00:01:18,609
os orifícios com controle negativo ficam inalterados.

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00:01:18,609 --> 00:01:22,929
Os orifícios com controle positivo formam um botão visível no fundo

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00:01:22,929 --> 00:01:28,840
e a solução nesses orifícios passa de leitosa para translúcida.

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00:01:28,840 --> 00:01:35,219
Então, o que explica o aparecimento de orifícios positivos

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00:01:35,219 --> 00:01:38,170
e o que explica a falta de alteração nos orifícios negativos?

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00:01:38,170 --> 00:01:42,679
Para entender o que acontece, vamos analisar a aparência microscópica

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00:01:42,679 --> 00:01:46,270
dos orifícios positivos e negativos, para ver o que acontece em cada caso.

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00:01:46,270 --> 00:01:51,049
Quando não existem anticorpos no orifícios, as pérolas permanecem em suspensão

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00:01:51,049 --> 00:01:53,169
conferindo-lhe um aspecto leitoso.

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00:01:53,169 --> 00:01:59,959
Mas, quando está presente um anticorpo específico. há união das pérolas e forma-se um reticulado.

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00:01:59,959 --> 00:02:05,569
Isto faz com que as pérolas se aglutinem e formam-se grandes agregados que precipitam

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00:02:05,569 --> 00:02:07,189
para o fundo arredondado dos orifícios.

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00:02:07,189 --> 00:02:12,560
A suspensão, que era leitosa, fica translúcida pela precipitação dos complexos,

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00:02:12,560 --> 00:02:17,750
e os agregados formam uma pastilha ou um botão no fundo do orifício.

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00:02:17,750 --> 00:02:22,320
Então, há a formação de um botão no fundo dos orifícios

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00:02:22,320 --> 00:02:25,110
com anticorpos específicos suficientes para precipitar as pérolas.

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00:02:25,110 --> 00:02:29,860
Mas quando o anticorpo está muito diluído, não há precipitação.

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00:02:29,860 --> 00:02:36,860
Os títulos de anticorpos de um paciente são a última diluição de soro capaz de produzir precipitação.

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00:02:49,670 --> 00:02:54,550
Mas, como se explica a ausência de precipitação nos orifícios mais concentrados,

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00:02:54,550 --> 00:02:59,350
com soro com títulos mais altos, mostrados pela seta laranja?

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00:02:59,350 --> 00:03:04,190
Imagine um orifício que tem muito mais moléculas de anticorpo do que pérolas.

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00:03:04,190 --> 00:03:08,290
As pérolas vão ser totalmente revestidas por anticorpos

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00:03:08,290 --> 00:03:12,320
e não haverá possibilidade de reticulação e precipitação.

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00:03:12,320 --> 00:03:18,730
Este fenômeno, chamado de pró-zona, às vezes ocorre em casos de sífilis.

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00:03:18,730 --> 00:03:23,510
O teste de triagem padrão para sífilis é um ensaio de aglutinação

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00:03:23,510 --> 00:03:28,200
Adiciona-se soro não diluído às pérolas revestidas com o antígeno cardiolipina.

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00:03:28,200 --> 00:03:33,210
Na sífilis secundária, os títulos de anticorpos às vezes são tão altos

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00:03:33,210 --> 00:03:36,300
que o teste exibe uma pró-zona e o resultado é falso negativo.

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00:03:36,300 --> 00:03:40,870
Então, como podemos superar este problema potencial

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00:03:40,870 --> 00:03:42,390
e fazer um diagnóstico laboratorial correto?

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00:03:42,390 --> 00:03:46,610
Que tal diluir o soro e depois testar novamente?

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00:03:46,610 --> 00:03:51,000
Diluindo o anticorpo, neste caso, as quantidades de anticorpos e antígenos

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00:03:51,000 --> 00:03:53,510
tornam-se praticamente equivalentes.

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00:03:53,510 --> 00:03:56,670
Assim, existem condições para reticulação.

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00:03:56,670 --> 00:04:01,510
Quando ocorre a reticulação, forma-se um precipitado e desenvolve-se um botão

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00:04:01,510 --> 00:04:03,970
no fundo do tubo, que indica um teste positivo.