WEBVTT 00:00:00.269 --> 00:00:04.081 (French translation by Samuel Scherber) Le test d'agglutination est un moyen simple pour détecter et mesurer dans un échantillon clinique 00:00:04.081 --> 00:00:09.379 des anticorps reconaissant un antigène d'intérêt spécifique. 00:00:09.379 --> 00:00:15.006 On vous montrera dans cette animation les principes et les limitations potentielles de cet essai. 00:00:15.006 --> 00:00:21.038 Le réactif principal utilisé dans l'essai est une solution de perles minuscules insolubles qui sont généralement composées de 00:00:21.038 --> 00:00:22.083 latex. 00:00:22.083 --> 00:00:28.016 Autrement, les cellules bactériennes ou de levure tuées peuvent être utilisées comme des particules d'agglutinations 00:00:28.016 --> 00:00:31.001 pour mesurer les anticorps contre un agent pathogène microbien. 00:00:31.001 --> 00:00:36.055 Toutefois, dans cet exemple, des billes de latex seront utilisées; elles ont été préparées de telle sorte qu'elles sont totalement recouvertes par 00:00:36.055 --> 00:00:41.087 l'antigène d'intérêt et sont suffisamment concentrées pour produire 00:00:41.087 --> 00:00:45.071 une suspension laiteuse visible. 00:00:45.071 --> 00:00:49.063 Afin de mesurer les anticorps reconnaissant l'antigène, les particules sont ajoutées dans les puits d'une 00:00:49.063 --> 00:00:55.002 plaque microtitre de 96 échantillons. Puis, des sérums prélevés de patients différents sont ajoutés 00:00:55.002 --> 00:00:57.003 dans les puits de la première colonne. 00:00:57.003 --> 00:01:02.098 On effectue avec le sérum des dilutions de deux dans les rangs de façon consécutive, puis dans les dernières colonnes, 00:01:02.098 --> 00:01:12.006 on ajoute de sérum négatif connu et de sérum positif, qui tous les deux servent comme groupes de témoin. 00:01:12.006 --> 00:01:16.013 Lorsque la plaque est laissé en incubation à température ambiante, les puits contenant 00:01:16.013 --> 00:01:18.609 le sérum témoin négatif demeurera inchangés. 00:01:18.609 --> 00:01:22.929 Par contre, les puits contenant le sérum témoin positif ont développé un bouton visible à l'oeil nu 00:01:22.929 --> 00:01:28.084 au fond des puits et la solution dans ces puits a changé, d'apparence laiteuse à apparence claire. 00:01:28.084 --> 00:01:35.219 Qu'est-ce qui explique la différence en apparence entre les puits positifs et 00:01:35.219 --> 00:01:38.017 les puits négatifs, qui restent inchangés? 00:01:38.017 --> 00:01:42.679 Pour comprendre ce qui se passe, permettons de jeter un coup d'oeil au niveau microscopique dans les puits avec réactions négatives et positives 00:01:42.679 --> 00:01:46.027 pour voir ce qui se passe dans chaque cas. 00:01:46.027 --> 00:01:51.049 Lorsqu'il n'y a pas d'anticorps dans le puits contenant les perles, ces dernières restent en suspension, donnant 00:01:51.049 --> 00:01:53.169 une apparence laiteuse au puit. 00:01:53.169 --> 00:01:59.959 Cependant, lorsqu'il y a d'anticorps spécifiques présents, ils commencent à se lier à et à réticuler avec les billes. 00:01:59.959 --> 00:02:05.569 Cela provoque l'agglutination des billes et la formation des agrégats importants qui se coulent au fond des 00:02:05.569 --> 00:02:07.189 puits à fond rond. 00:02:07.189 --> 00:02:12.056 Cela rend la suspension claire au lieu de laiteuse, car les agrégats se coulent, 00:02:12.056 --> 00:02:17.075 s'agrégant en forme de pastille ou de bouton au fond du puits. 00:02:17.075 --> 00:02:22.032 Ainsi, vous verrez au bas d'un puits qui en contient assez des anticorps spécifiques un bouton 00:02:22.032 --> 00:02:25.011 pour précipiter les perles. 00:02:25.011 --> 00:02:29.086 Mais lorsque la concentration d'anticorps est trop diluée, le bouton n'apparaît plus. 00:02:29.086 --> 00:02:49.067 Le titre d'anticorps de patient est définie par la dernière dilution de sérum qui produit un bouton. 00:02:49.067 --> 00:02:54.055 Mais comment expliquer l'absence d'un bouton dans les puits les plus concentrés du sérum, 00:02:54.055 --> 00:02:59.035 avec le titre le plus élevé, comme montré par la flèche orange? 00:02:59.035 --> 00:03:04.019 Imaginez un puits qui contient beaucoup plus de molécules d'anticorps dedans que des perles. 00:03:04.019 --> 00:03:08.029 Dans ce cas, les billes seront complètement recouvertes d'anticorps et il n'y aura pas 00:03:08.029 --> 00:03:12.032 de possibilité de réticulation ou des précipitations. 00:03:12.032 --> 00:03:18.073 Ce phénomène, qui s'appelle 'prozone,' se produit parfois dans les patients atteints de la syphilis. 00:03:18.073 --> 00:03:23.051 Le test de dépistage standard pour la syphilis est un test d'agglutination dans laquelle 00:03:23.051 --> 00:03:28.002 du sérum pur est ajouté aux billes recouvertes avec l'antigène cardiolipine. 00:03:28.002 --> 00:03:33.021 Au cas de la syphilis secondaire, les titres d'anticorps sont parfois si élevées que le test présente 00:03:33.021 --> 00:03:36.003 un prozone et est donc faussement contrôlé négatif. 00:03:36.003 --> 00:03:40.087 Alors, comment surmonter ce problème potentiel et faire le 00:03:40.087 --> 00:03:42.039 diagnostic laboratoire correct? 00:03:42.039 --> 00:03:46.061 Aviez-vous pensé de diluer le sérum, puis faire un nouveau test? 00:03:46.061 --> 00:03:51.000 En diluant l'anticorps dans cette situation, les quantités d'anticorps et l'antigène seront 00:03:51.000 --> 00:03:53.051 assez équivalentes l'un à l'autre. 00:03:53.051 --> 00:03:56.067 Les conditions de réticulation sont alors atteintes. 00:03:56.067 --> 00:04:01.051 Maintenant, lorsque la réticulation se produit, un précipité se forme et un bouton se développe au fond 00:04:01.051 --> 00:04:03.970 d'un puits, indiquant un contrôle positif.