[Script Info]
Title: 
[Events]
Format: Layer, Start, End, Style, Name, MarginL, MarginR, MarginV, Effect, Text
Dialogue: 0,0:00:00.00,0:00:02.84,Default,,0000,0000,0000,,researchlabs@ واحد آموزشی شرکت طب یاران سیلک یاخته
Dialogue: 0,0:00:02.84,0:00:05.86,Default,,0000,0000,0000,,این ویدیو نشان می دهد که چگونه می توان با استفاده از
Dialogue: 0,0:00:05.86,0:00:09.33,Default,,0000,0000,0000,,PCR یک نوکلئیک اسید خاص را در نمونه های بالینی
Dialogue: 0,0:00:09.33,0:00:12.72,Default,,0000,0000,0000,,شناسایی کردو مفدار ان را سنجید
Dialogue: 0,0:00:13.33,0:00:23.24,Default,,0000,0000,0000,,این موضوع با شناسایی محصول PCR تکثیر شده انجام می شود
Dialogue: 0,0:00:23.66,0:00:31.19,Default,,0000,0000,0000,,این فرایند Real time PCRیا RT PCR نامیده می شود
Dialogue: 0,0:00:31.25,0:00:39.66,Default,,0000,0000,0000,,برای اینکه بفهمیم محصولات PCR چگونه شناسایی می شوند،
Dialogue: 0,0:00:39.66,0:00:45.78,Default,,0000,0000,0000,,در ابتدا باید اتفاقاتی که در یک سیکل PCR می افتد را بررسی کنیم.
Dialogue: 0,0:00:46.49,0:00:52.54,Default,,0000,0000,0000,,اولین مرحله در PCR، افزایش دمای واکنش
Dialogue: 0,0:00:52.54,0:00:56.18,Default,,0000,0000,0000,,و ذوب کردن dna دورشته ای می باشد.
Dialogue: 0,0:00:56.18,0:00:59.01,Default,,0000,0000,0000,,سپس وقتی که دما پایین امد،
Dialogue: 0,0:00:59.01,0:01:06.41,Default,,0000,0000,0000,,پرایمرهای اختصاصی به توالی های انتهایی dna می چسبند.
Dialogue: 0,0:01:06.92,0:01:12.74,Default,,0000,0000,0000,,حالا DNA جدید می تواند با فعالیت آنزیم پلیمراز
Dialogue: 0,0:01:12.74,0:01:16.08,Default,,0000,0000,0000,,در جهت های مخالف ساخته شود.
Dialogue: 0,0:01:16.08,0:01:20.100,Default,,0000,0000,0000,,در نتیجه دو کپی از DNA اولیه وجود خواهد داشت.
Dialogue: 0,0:01:24.55,0:01:28.03,Default,,0000,0000,0000,,اگر این فرایند را متوجه نشدید
Dialogue: 0,0:01:28.03,0:01:34.31,Default,,0000,0000,0000,,، ویدیوهای مربوط به PCRساده را یکبار دیگر مرور کنید.
Dialogue: 0,0:01:35.79,0:01:39.75,Default,,0000,0000,0000,,برای شناسایی تولید محصولات جدید در RT PCR،
Dialogue: 0,0:01:39.75,0:01:43.39,Default,,0000,0000,0000,,واکنش PCR نیاز به مواد دیگری نیز دارد:
Dialogue: 0,0:01:44.24,0:01:47.51,Default,,0000,0000,0000,,یک پروب DNAتک رشته ای.
Dialogue: 0,0:01:47.51,0:01:52.19,Default,,0000,0000,0000,,این پروب برای جفت شدن با بخشی از DNA طراحی شده است
Dialogue: 0,0:01:52.19,0:01:55.35,Default,,0000,0000,0000,,که در بین دو پرایمر سنتز می شود.
Dialogue: 0,0:01:55.42,0:01:59.18,Default,,0000,0000,0000,,به هرحال بر خلاف پرایمرها، این پروب با روش های اختصاصی
Dialogue: 0,0:01:59.18,0:02:02.08,Default,,0000,0000,0000,,شناسایی می شود.و حساسیت شناسایی را بالا می برد
Dialogue: 0,0:02:02.08,0:02:08.82,Default,,0000,0000,0000,,یکی از این نوکلئوتیدها با یک مولکول فلورسنت
Dialogue: 0,0:02:08.82,0:02:16.54,Default,,0000,0000,0000,,و دیگری با مولکول QUENCHER یا خاموش کننده لیبل می شود.
Dialogue: 0,0:02:16.64,0:02:20.79,Default,,0000,0000,0000,,مولکول خاموش کننده، به سرعت انرژی نورهای متساعدشده از
Dialogue: 0,0:02:20.79,0:02:23.14,Default,,0000,0000,0000,,فلورسنت را جذب می کند.
Dialogue: 0,0:02:23.14,0:02:26.71,Default,,0000,0000,0000,,البته تا زمانی که در فاصله نزدیکی از یکدیگر باقی بمانند.
Dialogue: 0,0:02:30.38,0:02:38.46,Default,,0000,0000,0000,,حالا بیایید ببینیم وقتی این مواد در واکنش حضور دارند، چه اتفاقی می افتد.
Dialogue: 0,0:02:40.04,0:02:44.04,Default,,0000,0000,0000,,پرایمرها به رشته های DNA جدا شده، می چسبد.
Dialogue: 0,0:02:44.04,0:02:48.04,Default,,0000,0000,0000,,پروب هم به جایگاه مکمل بین پرایمرها متصل می شود.
Dialogue: 0,0:02:49.58,0:02:54.97,Default,,0000,0000,0000,,انزیم، از دو انتهای پرایمرها، DNA جدید را می سازد.
Dialogue: 0,0:02:54.97,0:02:59.93,Default,,0000,0000,0000,,هم چنین این انزیم یک فعالیت خارج هسته ای دیگر هم دارد:
Dialogue: 0,0:03:00.90,0:03:04.90,Default,,0000,0000,0000,,این انزیم وقتی در مسیر خود به DNAدو رشته ای می رسد،
Dialogue: 0,0:03:04.98,0:03:08.22,Default,,0000,0000,0000,,تمامی نوکلئوتیدهای DNA را جدا کرده
Dialogue: 0,0:03:08.22,0:03:11.100,Default,,0000,0000,0000,,و ان ها دوباره جایگزین می کند.
Dialogue: 0,0:03:12.93,0:03:16.22,Default,,0000,0000,0000,,زمانی که پلیمراز، از پروب عبور می کند،
Dialogue: 0,0:03:16.22,0:03:24.69,Default,,0000,0000,0000,,نوکلئوتید دارای مارکر فلورسنت و خاموش کننده را از هم جدا می کند.
Dialogue: 0,0:03:24.69,0:03:31.39,Default,,0000,0000,0000,,وقتی این دو مارکر جدا شدند، مولکول فلورسنت در صورت تحریک
Dialogue: 0,0:03:31.39,0:03:34.74,Default,,0000,0000,0000,,میتواند نور قابل تشخیصی را تولید کند.
Dialogue: 0,0:03:34.74,0:03:38.36,Default,,0000,0000,0000,,هر بار که رشته جدید از DNA ساخته می شود،
Dialogue: 0,0:03:38.36,0:03:42.94,Default,,0000,0000,0000,,یک مولکول فلورسنت از خاموش کننده خود جدا می ماند.
Dialogue: 0,0:03:43.06,0:03:48.86,Default,,0000,0000,0000,,بنابراین با دوبرابر شدن مقدار DNA در هر سیکل PCR،
Dialogue: 0,0:03:48.86,0:03:53.76,Default,,0000,0000,0000,,مقدار انرژی تولیدی توسط فلورسنت نیز بالا می رود.
Dialogue: 0,0:03:53.82,0:04:02.15,Default,,0000,0000,0000,,این انرژی زیاد توسط یک فلورمتر در داخل \Nدستگاه ترموسایکلر اندازه گیری می شود.
Dialogue: 0,0:04:02.72,0:04:09.29,Default,,0000,0000,0000,,بنابراین اگر شما فرایند را با نمونه بالینی دارای یک کپی از DNA اغاز کنید،
Dialogue: 0,0:04:09.34,0:04:12.78,Default,,0000,0000,0000,,به اندازه 40 سیکل PCR زمان می برد
Dialogue: 0,0:04:12.78,0:04:16.86,Default,,0000,0000,0000,,تا این انرژی از طریق فلورمتر دستگاه، شناسایی شود.
Dialogue: 0,0:04:17.23,0:04:24.37,Default,,0000,0000,0000,,اگر نمونه شما دارای بیش از 32 کپی از DNA باشد،
Dialogue: 0,0:04:24.37,0:04:30.62,Default,,0000,0000,0000,,فرایند شناسایی در طی 5 سیکل کمتر اتفاق می افتد.
Dialogue: 0,0:04:31.62,0:04:36.92,Default,,0000,0000,0000,,و اگر 1024 برابر بیشتر از نمونه خود را داشته باشید،
Dialogue: 0,0:04:36.92,0:04:42.46,Default,,0000,0000,0000,,فلورسنت در طی 10 سیکل کمتر شناسایی خواهد شد.
Dialogue: 0,0:04:43.17,0:04:50.49,Default,,0000,0000,0000,,بنابراین مقدار DNA موجود در نمونه،\Nبا توجه به تعداد سیکل های PCR شناسایی خواهد شد.
Dialogue: 0,0:04:50.49,0:04:57.06,Default,,0000,0000,0000,,زیرا مقدار فلورسنت نمونه به پایین ترین حد استانه تشخیص رسبده است
Dialogue: 0,0:04:57.06,0:05:05.55,Default,,0000,0000,0000,,RT PCR معمولا برای شناسایی مقدار ویروس در خون بیماران HIV ،
Dialogue: 0,0:05:05.55,0:05:10.48,Default,,0000,0000,0000,,هپاتیت B و دیگر ویروس ها به کار می رود
Dialogue: 0,0:05:10.48,0:05:15.36,Default,,0000,0000,0000,,اما HIV یک ویروس دارای RNA است و DNA ندارد.
Dialogue: 0,0:05:15.37,0:05:18.93,Default,,0000,0000,0000,,RNAتک رشته ای است.
Dialogue: 0,0:05:18.93,0:05:24.07,Default,,0000,0000,0000,,بنابراین این فرایند چگونه انجام می شود؟
Dialogue: 0,0:05:24.21,0:05:28.29,Default,,0000,0000,0000,,پاسخ این است: RNA بعد از کپی شدن
Dialogue: 0,0:05:28.29,0:05:33.88,Default,,0000,0000,0000,,یا تبدیل شدن به DNA دو رشته ای اندازه گیری می شود.
Dialogue: 0,0:05:33.90,0:05:37.90,Default,,0000,0000,0000,,این انیمیشن چگونگی این موضوع را نشان می دهد.
Dialogue: 0,0:05:39.17,0:05:44.16,Default,,0000,0000,0000,,در ابتدا RNA ویروسی از ویروس ازاد میشود
Dialogue: 0,0:05:44.16,0:05:53.96,Default,,0000,0000,0000,,سپس با استفاده از انزیم ریورس ترنس کریپتاز، از RNA ویروسی یک DNA مکمل ساخته می شود.
Dialogue: 0,0:05:55.34,0:05:56.34,Default,,0000,0000,0000,,مشابه عمل ترجمه ی طبیعی که اتفاق می افتد
Dialogue: 0,0:05:57.72,0:06:02.84,Default,,0000,0000,0000,,در بعضی از پروتوکل ها یک انزیم RNase اختصاصی هم اضافه می شود
Dialogue: 0,0:06:02.84,0:06:07.03,Default,,0000,0000,0000,,تا RNA را بسازد و به ان اجازه می دهد تا تجزیه شود.
Dialogue: 0,0:06:08.60,0:06:14.06,Default,,0000,0000,0000,,جدا از اینکه این مرحله اتفاق بیوفتد یا نه، مرحله کلیدی بعدی این است
Dialogue: 0,0:06:14.06,0:06:23.53,Default,,0000,0000,0000,,که مشابه با واکنش PCR، DNAپلیمراز و پرایمر یک رشته DNA مکمل را می سازد.
Dialogue: 0,0:06:23.54,0:06:30.38,Default,,0000,0000,0000,,در انتهای واکنش، RNA تک رشته ای ویروسی
Dialogue: 0,0:06:30.38,0:06:37.21,Default,,0000,0000,0000,,به DNA دور شته ای تبدیل شده که همان نوکلئوتیدها را دارد.
Dialogue: 0,0:06:37.32,0:06:43.32,Default,,0000,0000,0000,,حالا فرایند PCR می تواند برای این ,DNA همانند قبل انجام شود.
Dialogue: 0,0:06:43.32,0:06:43.57,Default,,0000,0000,0000,,researchlabs@ مرجع دانلود ویدئو های آموزشی